酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）是一種廣泛應(yīng)用測定樣本中的蛋白、抗體或激素的的免疫分析技術(shù)。ELISA將蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體固定在固相載體上，再加入含有待測抗體，形成一個抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶標(biāo)記了，可以直接來檢測抗原的量，如沒有，則可以用酶標(biāo)二抗來測定抗原的量。加入酶的底物，底物產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原呈正比的關(guān)系，依此原理計(jì)算出樣本的抗原總量和濃度。結(jié)合ELISA原理，ELISA分為4種方法，每種方法優(yōu)缺點(diǎn)不同。下面通蔚生物為大家詳細(xì)介紹一下。
將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的抗體，即可測定抗原總量。
優(yōu)勢：直接elisa法操作簡單，因不需要二抗，避免交叉反應(yīng)
缺勢：實(shí)驗(yàn)中一抗需酶標(biāo)，并不是所有抗體都需要酶標(biāo)，成本相對較高
此方法和直接ELISA法區(qū)別不是很大，多了酶標(biāo)二抗，用酶標(biāo)二抗去辨識一抗來測定抗原的量。
優(yōu)勢：二抗可以加強(qiáng)信號
缺勢：交叉反應(yīng)發(fā)生機(jī)率較高
被檢測的抗原包被在2個抗體之間，其中一個抗體將抗原固定于固相載體上，既捕捉抗體。另一個是檢測抗體，此抗體可以用酶標(biāo)記后直接測定抗原的量；或者不標(biāo)記，在使用酶標(biāo)二抗來測定抗原的量。這2種抗體要小心選擇，才可避免交叉反應(yīng)或競爭相同抗原結(jié)合部位。
優(yōu)勢：高靈敏、高專一性、抗原無須事先純化。
缺勢：抗原一定要擁有兩個以上抗體結(jié)合部位
樣本里的抗原和純化并固定在固相載體上的抗原一起競爭相同的抗體，當(dāng)樣品中的抗原越多，就可以結(jié)合越多的抗體，而固定的抗原就只能結(jié)合較少的抗體，
優(yōu)勢：可適用比較不純的樣本，而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
缺勢：整體的敏感性和專一性都較差。
上述是ELISA實(shí)驗(yàn)4種較為常見的方法優(yōu)缺點(diǎn)對比。每種方法對應(yīng)不同實(shí)驗(yàn)需求和樣本，才能事半功倍。
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