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植物安排制備基因組DNA操作方法
更新時(shí)間:2023-04-26   點(diǎn)擊次數(shù):825次

1. ELISA試劑盒收取10~50 g 新鮮的植物安排。

2. 植物安排用冷的無菌水洗刷、吸干,放人液氮中凍結(jié),用研缽和研杵研成細(xì)粉。

3. 將凍結(jié)的細(xì)粉放入250 ml 的離心瓶中,立即參加抽提緩沖液約每克植物5~10 ml,輕輕攪拌混勻。

4. 參加十二烷基肌氨酸鈉使終濃度達(dá)1%,于溫育1~2 h。

5. 用JA-14轉(zhuǎn)子4℃,5 500 g 離心10min 保存上清,必要時(shí)重復(fù)此歩驟以除掉殘?jiān)?/span>

6. 加人0.6體積yi丙醇,混合,假如看不見沉積,于-20℃放置30 min,用JA-14轉(zhuǎn)子4℃,7 500 g 離心15 min,棄上清。

7. ELISA試劑盒沉積用9 ml TE緩沖液重懸,參加9.7 g 固體氯化銫,混勻,冰上放置30 min,用JA-14轉(zhuǎn)子,7 500 g 離心10 min,保存上清。

8. 參加0.5 ml 10 mg/ml 的溴化乙錠,冰上放置30 min,4℃ 7500 g  離心10min.

9. 將上清轉(zhuǎn)入兩個(gè)5 ml 的快封超離心管中,并封口。

10. 用VTi80轉(zhuǎn)子20℃ 525 000 g 離心4 h,或20℃,300 000 g 離心,用15號(hào)針頭和注射器收集帶。

11. 用氯化艷飽滿的yi丙醇重復(fù)抽提DNA以除掉溴化乙錠。

12. 參加2體積水和6體積100%乙醇,混勻,-20℃放置1 h,用JA-20或JA-21轉(zhuǎn)子4℃,7500 g 離心10 min。

13. 沉積用TE緩沖液重懸,參加1/10體積的3 mol/l 乙酸鈉和2體積的100%乙酵重懸,重復(fù)離心。

14. 沉積曬干后用TE緩沖液重懸ELISA試劑盒。

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