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影響細(xì)胞株凍存的因素
更新時(shí)間:2023-03-08   點(diǎn)擊次數(shù):1090次

你們細(xì)胞是怎么凍存的?求解!!!我的是4度冰箱放半小時(shí),-20度冰箱半小時(shí),然后轉(zhuǎn)移到-80度冰箱!但是放在-80度冰箱1個(gè)月后,細(xì)胞復(fù)蘇就感覺(jué)狀態(tài)不太好了!!

做實(shí)驗(yàn)前要先學(xué)會(huì)凍存,以備自己在后面的實(shí)驗(yàn)中能保持同一來(lái)源、穩(wěn)定可靠的細(xì)胞,且可減少污染或其它不利影響。


影響凍存細(xì)胞活性的因素

1、細(xì)胞凍存保護(hù)劑:常用的有二甲基亞砜(DMSO)和甘油,常用的濃度為5%-10%(90%小牛血清)。DMSO對(duì)二倍體細(xì)胞的毒性較甘油小。

2、細(xì)胞懸液的凍結(jié)速度:慢凍時(shí)冰凍在細(xì)胞外形成,因此不致?lián)p害細(xì)胞。多數(shù)細(xì)胞以每分鐘下降1℃的速度,降至-20℃凍結(jié)。均可獲得滿意效果。

3、保存溫度:液氮罐,可達(dá)到-196℃,此時(shí)所有的物理化學(xué)活動(dòng)均降至zui低限度,以保證細(xì)胞長(zhǎng)期保存。

4、復(fù)蘇:急速融化復(fù)蘇可防止損害細(xì)胞。凍結(jié)細(xì)胞從液氮中取出后,應(yīng)立即放入37℃~43℃的水浴中,30秒至一分鐘內(nèi)融化。

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